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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:A875人黑色素瘤細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào):P-X651
  • 產(chǎn)品**:派瑞曼
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡(jiǎn)單介紹:
A875人黑色素瘤細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:A673人橫紋肌瘤細(xì)胞貼壁生長多邊形細(xì)胞樣A673:A673人細(xì)胞系組織來源:肌肉;橫紋肌肉瘤GC(氣相)試劑盒小鼠白介素1受體Ⅱ(IL1R2)elisa檢測(cè)試劑盒
詳情介紹:

A-875;A875;人黑色素瘤細(xì)胞


英文簡(jiǎn)稱

規(guī)格

貨號(hào)

A875:A875

1×106

P-X651

產(chǎn)品詳情:


細(xì)胞別稱:A-875;A875;人黑色素瘤細(xì)胞

種屬來源:人

年齡性別:40

組織來源:皮膚

生長特性:貼壁生長

細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介:該細(xì)胞是一株人黑色素瘤細(xì)胞系。A875細(xì)胞NGF受體陽性,可用于建立動(dòng)物研究模型。

生物等級(jí):

細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè):無

基因表達(dá)情況:

保藏機(jī)構(gòu):中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫

培養(yǎng)基:MEM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件:無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間:

STR鑒定位點(diǎn)AmelogeninX;CSF1PO11,12;D13S3178,12D16S53911,12;D18S5117D19S43313.2,14D21S1128,30.2;D2S133820,24;D3S135814,15;D5S8181113;D7S820811;D8S117911;FGA22;TH019.3;TPOX8,11;vWA15,16;

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理:


實(shí)驗(yàn)步驟:


1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。

公司正在出售的產(chǎn)品:

NBPF7蛋白抗體

中性鞘磷脂2抗體

NBPF7

TRIM50蛋白抗體  Anti-TRIM50

細(xì)胞生長抑制蛋白26/前列腺特異性膜抗原樣蛋白抗體

H2N2 Hemagglutinin

FOLH1B

甲型流感病毒(H2N2)血凝素抗體

脯氨酸羥化酶抗體  Anti-PHD3

NSMase2

6磷酸果糖激酶抗體  Anti-PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase

phospho-MEK5 (Ser142)

絲氨酸蛋白酶抑制劑A10抗體  Anti-ZPI/SERPINA10

嗅覺受體5J2抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體

OR5J2

大鼠α1抗胰蛋白酶前體(pre-α1-AT)elisa分析檢測(cè)試劑盒

乙型肝炎X蛋白HBX抗體(N端)  Anti-X protein/HB-X (N-Terminus)

pre-α1-AT ELISA Kit

背板膠質(zhì)乙酰酯酶抗體  Anti-NOTUM

人過氧化氫酶(CAT)elisa分析檢測(cè)試劑盒

單鏈結(jié)合蛋白70抗體  Anti-RPA70

CATELISAkit

分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體  Anti-SFRP1

石蠟切片KUNEL測(cè)定試劑盒

酵母硫氰酸酶(rhodanase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

大鼠纖維蛋白原(FG)elisa檢測(cè)試劑盒

A875人黑色素瘤細(xì)胞小鼠B細(xì)胞活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)elisa檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體

血管加壓素激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體

LMCD1

Cullin 5

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