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操作步驟:
A:組織中提取
1.收集 0.1g 組織,加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實驗選擇),冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。
2.將勻漿后樣品轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中,11000rpm 5min,吸棄上清保留沉淀。
3.至步驟 2。
B:細胞中提取
1.收集約 10 8個細胞,3000rpm 5min(懸浮細胞直接離心,貼壁細胞使用細胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等),吸棄上清。
2.至步驟 1。
步驟 1:加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實驗選擇),冰上孵育 30min(每 10min 用移液槍 吹打一次),4°C 11000rpm 離心 5min,棄上清。
步驟 2:于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2,置于冰上 30min(每 10min 渦旋一次),4°C 11000rpm 離心 5min,吸取上清于一新離心管中。
步驟 3:加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中,用移液槍輕輕吹勻。
步驟 4:使用 BCA 定量試劑盒定量。
步驟 5:于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer,輕輕吹勻,并應用于下游研究。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
檢測方法 |
適用樣本 |
保存溫度 |
貨號 |
蛋白脫脂肪柱 |
個 |
|
|
2-8℃ |
BH-D85500 |
自備儀器和試劑耗材:
儀器準備:
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備:
1.PBS 緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備:
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用方法:
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
注意事項:
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗,以優(yōu)化實驗條件,取得佳實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
5. 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底殘留清潔劑。
6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。
人cAMP反應元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Toll樣受體-4 48T/96T
結(jié)合珠蛋白 48T/96T
小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗磷壁酸抗體(TA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠胃動素(MTL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人游離甲狀腺素(FT4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
蛋白脫脂肪柱spindly抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-SPY
鏈霉素抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-streptomycin
轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-TBX3
磷酸化血管**素受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-Phospho-Tie2 (Tyr992)
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-TRAF1
微管蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-Tubulin-alpha
絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-WNK3 protein
囊泡乙酰膽堿通道抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-VAT
蛇毒巴曲酶抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-Batroxobin Protein
熒光素標記AP2關(guān)聯(lián)激酶1抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-AAK1/FITC
熒光素標記抗F-肌動蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-F-Actin/FITC
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