干冰運輸及復蘇好存活細胞

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

人肥大細胞；HMC-1

英文名稱	HMC-1	產(chǎn)品形態(tài)	母細胞樣 懸浮生長
貨號	P-X10918	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	外周血	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱；HMC1; HMC-1; 人肥大細胞

種屬來源；人

年齡性別；52歲，男

組織來源；外周血

生長特性；懸浮生長

細胞形態(tài)；母細胞樣

細胞代數(shù)；10代以內(nèi)

背景簡介；來源于一名 52 歲男性肥大細胞白血病患者的外周血樣本。該細胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細胞功能研究，因為它們表現(xiàn)出組織肥大細胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細胞表面抗原譜的表達 (1,2)。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細胞上表達，在肥大細胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細胞生長失調(diào)有關(guān)，并與肥大細胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細胞增多癥有關(guān)。據(jù)報道，HMC-1 細胞系中存在兩個 KIT 激活點突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài)，導致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 (HMC-1(560)) 和 HMC-1.2 (HMC-1(560,816)) 是HMC-1 細胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變。

STR位點；AmelogeninX：CSF1PO：10,13;D2S1338：17,25;D3S1358：15;D5S818：12,13;D7S820：10,11;D8S1179：12 ;D13S317：10,11;D16S539：10,12;D18S51：14,20;D19S433：14;D21S11：29;FGA：18,20;Penta D：11;Penta ：E9,19;TH01：7,9.3;TPOX：8,11;vWA：17,19

細胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測；無

保藏機構(gòu)；DSMZ；ACC-283 - Discontinued

培養(yǎng)基；IMDM+10%FBS+1%PS

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞培養(yǎng)操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓毎麘乙杭尤?6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

DH5α鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)	酵母V型ATP酶（V type ATPase ）活性比色法定量檢測試劑盒
乳酸脫氫酶（LDH）測試盒	Fas相互作用蛋白激酶3抗體
大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)elisa檢測試劑盒免費代測	糖蛋白β-1B抗體
無胎牛血清（活性碳/葡聚糖處理）	OTX2
HIPK3	轉(zhuǎn)錄因子OTX2抗體
擬南芥ACA11抗體	小鼠拓撲異構(gòu)酶Ⅰ(TOP1)elisa檢測試劑盒
ACA11	人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa生化檢測試劑盒
大鼠半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶(GALT)elisa檢測試劑盒	Hemopexin
PE標記的小鼠抗人IgG H&L	轉(zhuǎn)移生長因子β2抗體（TGFβ2）  Anti-TGF beta 2 Propeptide
Mouse Anti-Human IgG H&L / PE	前列腺酸性磷酸酶抗體  Anti-PSAP/PAP
FBXO4蛋白抗體	腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白2抗體  Anti-Proteasome 26S S2/TRAP2
FBXO4	5-羥色胺受體6抗體  Anti-5HT6 Receptor/SR-6
人A激酶PRKA錨定蛋白12(Akap12)elisa生化檢測試劑盒	小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(sTRAIL)elisa生化檢測試劑盒
humanAkap12ELISAKit	人肥大細胞；HMC-1sTRAILELISAKIT
大鼠II型角蛋白,細胞骨架71(KRT71)elisa生化檢測試劑盒	人谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶6抗體(IgM)elisa生化檢測試劑盒
type II cytoskeletal 71(KRT71)ELISA kit	Humantransglutaminase6antibodyIgMELISAkit

三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。