服務(wù)流程： 

（1）客戶提供：目的細(xì)胞具體信息；

（2）操作過程：細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，細(xì)胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細(xì)胞系/細(xì)胞株，以及細(xì)胞使用說明書。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實驗要點及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長情況。

4. 貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因為細(xì)胞培養(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細(xì)胞我們會酌情處理，但不提供免費更換服務(wù)。 細(xì)胞運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

TE緩沖液，pH7.0　pMCSG14 (linearized)

人精氨酸加壓素(AVP)ELISA Kit　Butyl alcohol(1-丁醇、正丁醇）

3T6-Swiss albino細(xì)胞株　羊偽結(jié)核棒狀桿PCR檢測試劑盒

pGEM-3z/602(pGEM3z602)　NB培養(yǎng)基

豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA Kit　WBC Lysis Buffer（白細(xì)胞裂解液）

克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液　人絨毛膜促腺(HCG)ELISA Kit

pSTAT3-TA-Luc (pSTAT3TALuc)（60908-6330）y　Raji細(xì)胞株

Sodium Acetate Solution（乙酸鈉溶液）,3M,pH7.0　pJQ210uc1

人長效甲狀腺(LATS)ELISA Kit　金胺O

Sulfurimonas paralvinella medium　蠶微粒子病PCR檢測試劑盒

pET-11a（pET11a）(60908-2774)　YIplac128

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA Kit　L2605

DNA去磷酸化試劑盒　人抗高爾基體抗體(AGAA)ELISA Kit

大鼠腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞洛美沙星 英文名稱：Lomefloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

環(huán)丙沙星 英文名稱：Ciprofloxacin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

諾氟沙星 英文名稱：Norfloxacin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

辛烷磺酸鈉 英文名稱：Octane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

2-苯乙酰胺 英文名稱：2- benzene acetamide 規(guī)格：：65mg 保存：：-20℃，避光

3-乙氧基－4－羥基苯甲醛 英文名稱：3- ethoxy - 4 - hydroxy benzaldehyde 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

磺酸鈉 英文名稱：Hexane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

磺酸鈉 英文名稱：Pentane sulfonic acid sodium salt 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

咪唑試劑 英文名稱：Imidazole reagent 規(guī)格：：100克 保存：：-20℃，避光

青霉素酶（10支/次購買量） 英文名稱：Penicillinase (10 / times purchased) 規(guī)格：：2ml/支 保存：：-20℃，避光

裂霉素 英文名稱：Mitomycin 規(guī)格：：25mg 保存：：-20℃，避光

操作流程：

1、您收到母細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。