操作流程：

1、您收到母細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

服務(wù)流程： 

（1）客戶提供：目的細胞具體信息；

（2）操作過程：細胞復蘇培養(yǎng)，細胞發(fā)貨；

（3）交付內(nèi)容：細胞系/細胞株，以及細胞使用說明書。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明 ：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3. 靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4. 貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。

5. 細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。

6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制，

7. 因為細胞培養(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細胞我們會酌情處理，但不提供免費更換服務(wù)。 細胞運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

DNA堿膠上樣液（10 mL)　人補體蛋白4(C4)ELISA Kit

pPD5_41（pPD541）　Sulfobacillus disulfidooxidans medium

Wiesel 染色法特殊細胞染色試劑盒　pEMBLYi27

大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA Kit　小鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA Kit

1/4MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）　潮B

pcDNA-DEST53（pcDNADEST53）　pSFV1 (60908-6111)y

人游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA Kit　Gel Coupling Solution

大提柱式動物DNAout　雞肌紅蛋白(MYO/MB) ELISA Kit

pMCSG38　Lactobacillus medium iv

Phosphate Buffer(磷酸緩沖液)，0.1M，pH6.0　pDsRed-Monomer-Golgi（pDsRedMonomerGolgi）（60908-2522）

大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(DAT)ELISA Kit　小鼠白介素13(IL-13)ELISA Kit

Clostridium thermosuccinogenes medium　分子生物學糖原干粉（1g）

pAJ655　pPIC6α B（pPIC6αB）

大鼠卵巢表面上皮細胞頭孢呋辛酯 英文名稱：Cefuroxime axetil 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

舒他西林 英文名稱：Sultamicillin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

青霉素V 英文名稱：Penicillin V 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

金霉素 英文名稱：Aureomycin hydrochloride 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

四環(huán)素 英文名稱：Tetracycline hydrochloride 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

克林霉素酯 英文名稱：Clindamycin phosphate 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

多西環(huán)素 英文名稱：Doxycycline 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

頭孢他啶 英文名稱：Ceftazidime 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

頭孢噻肟 英文名稱：Cefotaxime 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

苯唑西林 英文名稱：Oxacillin 規(guī)格：：500mg 保存：：-20℃，避光

頭孢克洛 英文名稱：Cefaclor 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光